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非洲豬瘟病毒檢測(cè)實(shí)操方案

更新時(shí)間:2019-08-21      瀏覽次數(shù):2687

非洲豬瘟(African swine fever, ASF)是由非洲豬瘟**感染家豬和野豬后產(chǎn)生的一種烈性傳染疾病。此疫情從2018年8月傳入我國后,迅速大范圍蔓延,截至今日,已席卷大半個(gè)中國,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了重大的威脅和不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。

非洲豬瘟**是一種具有囊膜結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA**,感染家豬和野豬后引起高熱、出血和高死亡率。PCR方法由于具備高靈敏度、高特異性和快速的特點(diǎn),被用于非洲豬瘟**的檢測(cè)。
      下面結(jié)合實(shí)際操作應(yīng)用,跟大家分享一套可靠的非洲豬瘟**檢測(cè)方案。

                              非洲豬瘟感染組織樣本和蜱類樣本的前處理

      非洲豬瘟易感的對(duì)象主要包括家豬,野豬和蜱,通常采集的樣品為血液、組織和蜱三類。對(duì)于組織樣本和蜱,在核酸提取前需要對(duì)樣本進(jìn)行充分的破碎,使其核酸充分地釋放出來,才能進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和診斷。

 

MM400高通量組織研磨儀可對(duì)非洲豬瘟感染動(dòng)物組織或蜱進(jìn)行充分破碎、混合、均質(zhì)化

德國萊馳(RETSCH)MM400研磨儀可謂是組織樣本前處理界的專家,也是各實(shí)驗(yàn)室樣品粉碎的“多面手”,深受各行業(yè)用戶的喜愛和信賴。對(duì)于動(dòng)植物組織的細(xì)胞破碎可同時(shí)處理多達(dá)10、20、48、192個(gè)樣品,典型樣品如各種動(dòng)物組織、植物組織、細(xì)菌、酵母等樣本。研磨中樣品管獨(dú)立且密封,無需擔(dān)心交叉污染問題,保證您的樣本安全。典型研磨時(shí)間30s-2min,可處理樣品,提高工作效率。



                     MM400冷凍混合研磨儀

                           MM400冷凍混合研磨儀部分配件

具體豬瘟感染組織類研磨方案可參考以下步驟


                                          MM400冷凍混合研磨儀實(shí)驗(yàn)


               
                    豬瘟**的檢測(cè)——PCR方法

 

1、研磨后的樣品,離心后取上清液200ul,進(jìn)行核酸純化;
2、PCR法檢測(cè)ASFV**

       現(xiàn)行ASFV(非洲豬瘟**)主要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方式分為ASFV**檢測(cè)和ASFV抗體檢測(cè)。在所有方法其中很受關(guān)注的是PCR法,PCR已成功應(yīng)用于豬樣品(血液、器官、肉制品等)和蜱中ASFV基因組的檢測(cè)。ASFV為DNA**,核酸穩(wěn)定性高,所有經(jīng)過驗(yàn)證的PCR技術(shù)均可以在活體豬臨床癥狀出現(xiàn)前實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。PCR是可以代替**分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV 檢測(cè)技術(shù)。同時(shí),相比于抗原檢測(cè)技術(shù),如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),PCR具有更高的敏感性和特異性。PCR技術(shù)本身還分為成本較低的普通PCR電泳法和速度更快的實(shí)時(shí)熒光PCR法(qPCR)。

      OIE 在《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》(2016年)中推薦使用的常規(guī)和實(shí)時(shí)熒光PCR得到了長期的充分驗(yàn)證,是常規(guī)診斷的重要工具。引物和探針多以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計(jì),同樣可檢測(cè)的編碼**結(jié)構(gòu)蛋白基因還有p54、K205R等,基因越穩(wěn)定、在宿主體內(nèi)復(fù)制轉(zhuǎn)錄越早則越適合作為PCR靶基因。

      對(duì)于特急性、急性或亞急性ASF感染病例,PCR是優(yōu)選的檢測(cè)技術(shù)。
德國RETSCH實(shí)驗(yàn)室可為感興趣的老師提供樣機(jī),歡迎垂詢!

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